Свою сексуальную ориентацию Анна Листер определяла как “склонность к леди”, и в собственных чувствах она всегда была уверена: “Я любила и люблю прекрасный пол, и была любима им в ответ, мое сердце питает отвращение к любой любви кроме этой”. Не стоит забывать, что госпожа Листер была довольно образованной женщиной для своего времени и потому, чтобы открывать свои чувства другим женщинам, она использовала аналогии из древнегреческой литературы. Так, одной леди, с которой она флиртовала, Анна Листер долгое время рассказывала об отношениях между Ахиллом и Патроклом. В конце концов, дама не выдержала и спросила: “А вы тоже Ахилл?” Если на помощь не приходила греческая литература, то могли пригодиться цитаты из Библии, в которых говорилось о гомосексуальности.
Анна Листер пыталась изучать и медицинскую литературу того времени, в которой редко, но все же можно было найти упоминания о лесбиянках. Однако в основном их описывали как средний пол, гермафродитов, приписывали им особую анатомию. Это было не похоже на реальность, известную Листер, и она относилась к подобным трудам с откровенной иронией.
Первой серьезной любовью в жизни Анны была Марианна Лотон. Вместе они пытались создать стабильные отношения, а также экспериментировали с сексуальными практиками. Правда, Марианна стыдилась отношений, и не хотела, чтобы ее видели вместе с “недостаточно женственной” Анной. Многие начинали подозревать неладное в их дружбе, но женщины были готовы противостоять слухам. Однако там, где оказались бессильны косые взгляды, все решили финансы. Еще до того, как Анна смогла получить наследство, Марианна была вынуждена выйти замуж за нелюбимого мужчину. Причины были исключительно экономическими - у Марианны больше не было средств к существованию.